26/06
HOY NOS DEDICAMOS A AYUDAR A NUESTRA INVESTIGADORA CON LA RUTINA DIARIA.
LO QUE HICIMOS FUE FABRICAR MEDIO CONDICIONADO EN GRANDES CANTIDADES PARA TENER STOCK.
Y LUEGO LO FRACCIONAMOS A DISTINTAS CONCENTRACIONES.
jueves, 26 de junio de 2008
jueves, 19 de junio de 2008
Semana 5
Día 19/6
La semana anterior Debido a una falla en las estufas se murieron nuestras células.
Fabricamos una curva de tiempo para ver el crecimiento de los lípidos
C=control--> pre-adipocitos
D=diferenciados--> adipocitos maduros
F=factor--> adipocitos maduros + proteína TgIF
Cada uno de estos se cultivo y se fueron levantando y congelando a diferentes tiempos. Luego se les agregamos un reactivo que toma color en presencia de lípidos, y medimos con espectrofotometría
Resultado obtenido:
SE PUEDE COMPROBAR COMO LUEGO DE AGREGADA LA PROTEINA INHIBIDORA LA CANTIDAD DE LIPIDOS DISMINUYE, ESTO NOS MUESTRA QUE NUESTRO FACTOR FUNCIONA, ESTA PRUEBA SE REALIZO 3 VECES Y SE VIO QUE EL CAMBIO ES MUY SIGNIFICATIVO, LOS RESULTADOS SIEMPRE FUERON PARECIDOS
La semana anterior Debido a una falla en las estufas se murieron nuestras células.
Fabricamos una curva de tiempo para ver el crecimiento de los lípidos
C=control--> pre-adipocitos
D=diferenciados--> adipocitos maduros
F=factor--> adipocitos maduros + proteína TgIF
Cada uno de estos se cultivo y se fueron levantando y congelando a diferentes tiempos. Luego se les agregamos un reactivo que toma color en presencia de lípidos, y medimos con espectrofotometría
Resultado obtenido:
SE PUEDE COMPROBAR COMO LUEGO DE AGREGADA LA PROTEINA INHIBIDORA LA CANTIDAD DE LIPIDOS DISMINUYE, ESTO NOS MUESTRA QUE NUESTRO FACTOR FUNCIONA, ESTA PRUEBA SE REALIZO 3 VECES Y SE VIO QUE EL CAMBIO ES MUY SIGNIFICATIVO, LOS RESULTADOS SIEMPRE FUERON PARECIDOS
jueves, 5 de junio de 2008
Semana 4
Día 5/08
1. Revisamos la evolución de nuestras células.
2.Como no hubo mucho crecimiento solo les renovamos el medio.
Hasta hoy solo habiamos trabajado con células adiposas, hoy empezamos con las células epiteliales de mama, de estas a nosotras nos interesa una proteina que produce que inhibe la produccion de lipidos de los adipocitos, para aislarla del medio hay que seguir una serie de pasos:
1.Para empezar vamos a concentrar el medio donde estan nuestras células(sacarle el agua):
* Vamos a poner el medio en una membrana de dialisis-->"camita" de polietilenglicol
2.Tenemos que preparar un buffer para pasar nuestro medio por una columna de afinidad (para separar las proteinas)
Preparación de buffer C:
Se preparan 2 soluciones
*0.2M Na2HPO4
*0.2M NaHPO4
Luego ponemos 36ml de la primera y 14ml de la segunda]-->50ml de agua
así obtenemos un buffer 0.2M pH=7
Después hacemos una dilucion 1/10 para obtener el buffer 0.02M
Ya la proxima haremos la columna.
Hasta la semana que viene.
Fabiana y Tamara
1. Revisamos la evolución de nuestras células.
2.Como no hubo mucho crecimiento solo les renovamos el medio.
Hasta hoy solo habiamos trabajado con células adiposas, hoy empezamos con las células epiteliales de mama, de estas a nosotras nos interesa una proteina que produce que inhibe la produccion de lipidos de los adipocitos, para aislarla del medio hay que seguir una serie de pasos:
1.Para empezar vamos a concentrar el medio donde estan nuestras células(sacarle el agua):
* Vamos a poner el medio en una membrana de dialisis-->"camita" de polietilenglicol
2.Tenemos que preparar un buffer para pasar nuestro medio por una columna de afinidad (para separar las proteinas)
Preparación de buffer C:
Se preparan 2 soluciones
*0.2M Na2HPO4
*0.2M NaHPO4
Luego ponemos 36ml de la primera y 14ml de la segunda]-->50ml de agua
así obtenemos un buffer 0.2M pH=7
Después hacemos una dilucion 1/10 para obtener el buffer 0.02M
Ya la proxima haremos la columna.
Hasta la semana que viene.
Fabiana y Tamara
Semana 3
Generación de Stock
Lo primero que hay que hacer es preparar el medio, este debe contener:
· Glucosa
· Fructosa
· Aminoácidos
· Nutrientes
· Suero
· Buffer de pH 7
· Acido pirubico
· Vitaminas
Luego dividimos las células para que se sigan reproduciendo, para hacerlo:
Lo primero que hay que hacer es preparar el medio, este debe contener:
· Glucosa
· Fructosa
· Aminoácidos
· Nutrientes
· Suero
· Buffer de pH 7
· Acido pirubico
· Vitaminas
Luego dividimos las células para que se sigan reproduciendo, para hacerlo:
- Eliminamos el caldo donde están contenidas las células (los pre-adipocitos se pegan a las paredes).
- Luego los lavamos con una solución salina. (Ya que el suero del medio posee antitripsina y necesitamos eliminarlo).
- Agregamos una solución que posee tripsinas (así despegamos las células).
- Realizamos el recuento en cámara de Neubauer (esto lo hacemos para ver en cuentos recipientes podemos separar las células).
- División de células para generar Stock
- Almacenamiento
.
Algunas células las colocamos en wells, alli es donde, cuando haya suficientes pre-adipocitos, les agregaremos INSULINA (hormona que le da la señal a los pre-adipocitos de madurar a adipocitos) y estos adipocitos que obtendremos comenzarán a producir lipidos.
Ahí mismo agregaremos la proteína que creemos es la que inhibe la producción de lípidos y controlaremos para corroborar nuestra suposición.
Hasta la semana que viene!!!!
Fabiana y Tamara...
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