Semana 9

Caracterización de las proteínas

La semana pasada separamos unas proteínas
Hoy lo que vamos a hacer va a ser correr por electroforesis esas proteínas

Luego realizaremos un Western Blot, este nos dirá si posee las proteínas que estamos buscando.

Pero... ¿Que buscamos?
Buscamos enzimas específicas que afectan directa o indirectamente la producción de lípidos, lo que intentamos encontrar en es que momento de la producción lipídica del adipocito esta afectando nuestro factor.

Técnica utilizada:

El western blot es un método en biología molecular/bioquímica/inmunogenética para la detección de proteínas en una muestra de un tejido homogeneizado o extracto. Implementa gel electroforesis para separar proteínas desnaturalizadas de la masa. Las proteínas son transferidas desde el gel hacia la membrana (originalmente de nitrocelulosa), donde son examinadas utilizando anticuerpos específicos para la proteína. Como resultado, los investigadores pueden examinar la cantidad de proteínas en una muestra y comparar los niveles de presencia entre varios grupos.

Semana 8

10/7

Hoy preparamos los elementos para fabricar una curva, y determinar asi la cantidad de proteinas, y ver si estas se ven afectadas por el factor.

debido a que el procedimiento es muy largo nosotras solo alcanzamos a preparar los elementos pero no a fabricar la curva, la proxima vez que vengamos nos diran los resultados.

Entonces...
volvemos a tomar muestras de:
Factor
Diferenciadas
Control

Lo que hay que hacer es centrifugar en frio.
como hay que poner muy poca cantidad en los tubitos de centrifuga, lo que hicimos fue filtrar.



Luego lo que hicimos fue ponerlo en la centrifuga y como esto se hace en frio lo metimos en la heladera.




Luego lo que hicimos fue armar el gel para la electroforesis
Utilizamos 15%


Este luego lo utilizaremos para correr las proteinas que resulten de esta experiencia

Semana 7

03/07
Cromatografía en columna de Tamiz molecular o de exclusión molecular:
A diferencia de lo que ocurre en otras cromatografías, en el caso ideal de la cromatografía de exclusión molecular no existen interacciones por atracción entre la "fase estacionaria" y el soluto. Mas bien la fase móvil liquida o gaseosa pasa a través de un gel poroso. Los poros son lo suficientemente pequeños para excluir las moléculas grandes de soluto, pero no las pequeñas. La corriente de moléculas grandes pasa sin penetrar en el gel .las moléculas pequeñas requieren mas tiempo para pasar a través de la columna porque entran en el gel y por lo tanto deben fluir por un volumen mas grande antes de dejar la columna.

Hoy realizamos esta columna para separar y purificar nuestra proteína de interés.
1) filtramos el medio

2) Columna