PROYECTO QUIMICA ORT DEL GENOMA HUMANO

Investigación en bioquímica molecular y proteómica 2008
Por cuarto año consecutivo los alumnos del último año de la especialidad Química de la Escuela Técnica ORT Argentina realizarán sus proyectos finales en distintas universidades y centros de investigación con profesionales reconocidos. La metodología de trabajo evita la transpocisión didáctica permitiendo a los estudiantes realizar su actividad final en los lugares donde se está generando el conocimiento.
La articulación entre el nivel medio y el postgrado universitario es auspiciada por el CONICET (Consejo Nacional de Investigación Científica y Técnica).
Los proyectos de investigación para el año en curso son:

1) Evaluación de la expresión de la molecula de adhesión cadherina epitelial en tejidos humanos normales y tumorales.
Investigador: Dra. Mónica Vazquez-Levin.
Instituto: Instituto de Biología y Medicina Experimental(IBYME - CONICET).
Alumnos: Yael Dobzewicz Y Gala Szapiro.

Blog: http://www.proyecto-6q.blogspot.com/

2) Acción del hexaclorobenceno (HCB) sobre la uroporfirinogeno de una línea celular hepatocitos humanos. Mecanismo de acción.
Investigador: Dra. María del Carmen Ríos de Molina.
Instituto: Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.
Alumnos: Lucas Toiw y Uriel Frid.

Blog: http://www.proyectofrid-toiw08.blogspot.com/

3) Modelos experimentales de enfermedades metabólicas: Porfiria y Síndrome Metabólico. Proteómica y Metabolómica de estos disturbios.
Investigador: Dra. Marta Blanca Mazzetti.
Instituto: Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA).
Alumnos: Maria Duperron y Mauro Elencwajg.

Blog: http://www.proyectofinal6q.blogspot.com/

4) Factores no hemodinámicos relacionados con la génesis y evolución de la proteinuria durante la enfermedad renal progresiva.
Investigador: Dra. Elsa Zotta.
Instituto: Laboratorio de Fisiopatogénia, Departamento de fisiología, Facultad de medicina, UBA.
Alumnos: Barbara Helueni y Melanie Naiman.

Blog: http://www.proyectoq08.blogspot.com/

5) Estudio de la participacion de la anandamida en la regulacion de la interaccion espermatozoide-ovioducto en un modelo bovino.
Investigador: Dra. Silvina Perez Martinez.
Instituto: Facultad de medicina - UBA.
Alumnos: Judith Arenas Tenenbaum y Melina Braverman.

Blog: http://www.scienceproject08.blogspot.com/

6) El estudio de los mecanismos moleculares involucrados en la regulación del gen UGA4 de Saccharomyces cervisiae en respuesta a cambios en la disponibilidad de nutrientes con el fin de dilucidar las distintas cascadas de señales desencadenadas por dichos nutrientes y establecer sus interconexiones.
Investigador: Dra Susana Correa García.
Instituto: Departamento de Química Biologica, Facultad de ciencias Exactas y Naturales, UBA.
Alumnos: Iván Mikiej y Victoria Salama

Blog: http://www.proyectoquimica22.blogspot.com/

7) Diagnóstico de la enfermedad de Von Willebrand (VWD) tipo 2N por técnicas fenotípicas y genotípicas.
Investigador: Dra. Adriana I. Woods.
Instituto: Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex" de la Academia Nacional de Medicina.
Alumnos: Abigail Skverer y Daniela Lin

Blog: http://www.vwd-diagnostico.blogspot.com/

8) Estudio de la mielinogenesis en el sistema nervioso periferico en condiciones fisiologicas y patologicas. Participacion de celulas pluripotentes en el proceso de degeneracion-regeneracion nerviosa.
Investigador: Dra Patricia Setton-Avruj.
Instituto: Departamento de Quimica Biologica, Facultad de Farmacia y Bioquimica (IQUIFIB-UBA-CONICET).
Alumnos: Averbuj Daniel y Eitan Rozenszajn.

Blog: http://www.proyectoaverbuj-rozenszajn.blogspot.com/

9) Diseño y desarrollo de vacunas antitumorales empleando bacterias y celulas tumorales modificadas con genes inmunomodiladores. Estudio de los mecanismos inmunes inducidos.
Investigador: Claudia I. Waldner y Claudia Mongini.
Instituto: Laboratorio de inmunologia celular y molecular. Centro de Estudios Farmacologicos y Botanicos (CEFYBO. CONICET-UBA)
Alumnos: Amalia Surijon y Maria Belen Tolava Rivero.

Blog: http://www.amibeluproyecto.blogspot.com/

10) Marcadores Geneticos Asociados al Cáncer.
Investigador: Dr.Javier Hernán Cotignola.
Instituto: Laboratorio de Cáncer y Apoptosis del Departamento de Quimica Biologica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA.
Alumnos: Ayelén Marano y Solange Perchik

Blog: http://www.marcadoresgeneticos.blogspot.com/

11) Expresion del canal de la conductancia transmembranal de la Fibrosis Quistica (CFTR) en placentas Preeclampticas: posible rol en la regulacion de la actividad de la Acuoporina-9 (AQP9).
Investigador: Dr Alicia E Damiano.
Instituto: Catedra de Biologia Celular, Departamento de Ciencias Biologicas, Facultad de Farmacia y Bioquimica (UBA)
Alumnos: Gabriel Colodenco y Martín Sapir.

Blog: http://proyectofinalcs.blogspot.com/

12) Proteómica de factores secretados por células de cáncer de mama y mama normal con capacidad inhibitoria de la producción lipídica.
Investigador: Dra.Guerra de Grignoli Liliana Noemi.
Instituto: Departamento de Ciencias biologicas. Facultad de ciencias exactas y naturales, UBA-CONICET.
Alumnos: Fabiana Durante y Tamara Broitman.

Blog: http://tyf-proyecto08.blogspot.com/

13) Estudio de la Growth Associated Protein (GAP-43), su interacción con la Ubicutina y su participación en el control del ciclo celular en células NIH3T3 transfectadas en forma estable y transiente. Efecto de la Apo-transferrina en la remielización: participación de la vía Notch en la diferenciación oligodendrioglial.
Investigador: Dra Ana M. Adamo
Instituto: Departamento de Química Biológica Patológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UBA. CONICET.
Alumnos: Rodrigo C. Pampin y Robby Mattes

Blog: http://gap-43.blogspot.com/

14) Interacción de sumo-1 y mage-a2 en la regulacion del oncosupresor p53
Investigador: Martín Monte
Instituto: Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA)
Alumnos: Leonel Stermann y Yair Litman

Blog: http://proyectosumo.blogspot.com/

15) Neovascularización en un modelo murino de inflamaciòn aguda inducida por LPS.
Investigador: Eulalia de la Torre.
Instituto: Facultad de Medicina - Uba - Laboratorio de Inmunofarmacologia
Alumnos: Federico Mauas Walach, Pablo Kuleff.

Blog: http://finalproyectort.blogspot.com/

lunes, 18 de agosto de 2008

sábado, 26 de julio de 2008

Semana 9

Caracterización de las proteínas

La semana pasada separamos unas proteínas
Hoy lo que vamos a hacer va a ser correr por electroforesis esas proteínas

Luego realizaremos un Western Blot, este nos dirá si posee las proteínas que estamos buscando.

Pero... ¿Que buscamos?
Buscamos enzimas específicas que afectan directa o indirectamente la producción de lípidos, lo que intentamos encontrar en es que momento de la producción lipídica del adipocito esta afectando nuestro factor.

Técnica utilizada:

El western blot es un método en biología molecular/bioquímica/inmunogenética para la detección de proteínas en una muestra de un tejido homogeneizado o extracto. Implementa gel electroforesis para separar proteínas desnaturalizadas de la masa. Las proteínas son transferidas desde el gel hacia la membrana (originalmente de nitrocelulosa), donde son examinadas utilizando anticuerpos específicos para la proteína. Como resultado, los investigadores pueden examinar la cantidad de proteínas en una muestra y comparar los niveles de presencia entre varios grupos.

viernes, 11 de julio de 2008

Semana 8

10/7

Hoy preparamos los elementos para fabricar una curva, y determinar asi la cantidad de proteinas, y ver si estas se ven afectadas por el factor.

debido a que el procedimiento es muy largo nosotras solo alcanzamos a preparar los elementos pero no a fabricar la curva, la proxima vez que vengamos nos diran los resultados.

Entonces...
volvemos a tomar muestras de:
Factor
Diferenciadas
Control

Lo que hay que hacer es centrifugar en frio.
como hay que poner muy poca cantidad en los tubitos de centrifuga, lo que hicimos fue filtrar.



Luego lo que hicimos fue ponerlo en la centrifuga y como esto se hace en frio lo metimos en la heladera.




Luego lo que hicimos fue armar el gel para la electroforesis
Utilizamos 15%


Este luego lo utilizaremos para correr las proteinas que resulten de esta experiencia

viernes, 4 de julio de 2008

Semana 7

03/07
Cromatografía en columna de Tamiz molecular o de exclusión molecular:
A diferencia de lo que ocurre en otras cromatografías, en el caso ideal de la cromatografía de exclusión molecular no existen interacciones por atracción entre la "fase estacionaria" y el soluto. Mas bien la fase móvil liquida o gaseosa pasa a través de un gel poroso. Los poros son lo suficientemente pequeños para excluir las moléculas grandes de soluto, pero no las pequeñas. La corriente de moléculas grandes pasa sin penetrar en el gel .las moléculas pequeñas requieren mas tiempo para pasar a través de la columna porque entran en el gel y por lo tanto deben fluir por un volumen mas grande antes de dejar la columna.

Hoy realizamos esta columna para separar y purificar nuestra proteína de interés.
1) filtramos el medio

2) Columna

jueves, 26 de junio de 2008

Semana 6

26/06
HOY NOS DEDICAMOS A AYUDAR A NUESTRA INVESTIGADORA CON LA RUTINA DIARIA.
LO QUE HICIMOS FUE FABRICAR MEDIO CONDICIONADO EN GRANDES CANTIDADES PARA TENER STOCK.
Y LUEGO LO FRACCIONAMOS A DISTINTAS CONCENTRACIONES.

jueves, 19 de junio de 2008

Semana 5

Día 19/6

La semana anterior Debido a una falla en las estufas se murieron nuestras células.

Fabricamos una curva de tiempo para ver el crecimiento de los lípidos

C=control--> pre-adipocitos
D=diferenciados--> adipocitos maduros
F=factor--> adipocitos maduros + proteína TgIF

Cada uno de estos se cultivo y se fueron levantando y congelando a diferentes tiempos. Luego se les agregamos un reactivo que toma color en presencia de lípidos, y medimos con espectrofotometría


Resultado obtenido:





SE PUEDE COMPROBAR COMO LUEGO DE AGREGADA LA PROTEINA INHIBIDORA LA CANTIDAD DE LIPIDOS DISMINUYE, ESTO NOS MUESTRA QUE NUESTRO FACTOR FUNCIONA, ESTA PRUEBA SE REALIZO 3 VECES Y SE VIO QUE EL CAMBIO ES MUY SIGNIFICATIVO, LOS RESULTADOS SIEMPRE FUERON PARECIDOS

jueves, 5 de junio de 2008

Semana 4

Día 5/08

1. Revisamos la evolución de nuestras células.

2.Como no hubo mucho crecimiento solo les renovamos el medio.

Hasta hoy solo habiamos trabajado con células adiposas, hoy empezamos con las células epiteliales de mama, de estas a nosotras nos interesa una proteina que produce que inhibe la produccion de lipidos de los adipocitos, para aislarla del medio hay que seguir una serie de pasos:

1.Para empezar vamos a concentrar el medio donde estan nuestras células(sacarle el agua):
* Vamos a poner el medio en una membrana de dialisis-->"camita" de polietilenglicol



2.Tenemos que preparar un buffer para pasar nuestro medio por una columna de afinidad (para separar las proteinas)
Preparación de buffer C:
Se preparan 2 soluciones
*0.2M Na2HPO4
*0.2M NaHPO4
Luego ponemos 36ml de la primera y 14ml de la segunda]-->50ml de agua
así obtenemos un buffer 0.2M pH=7
Después hacemos una dilucion 1/10 para obtener el buffer 0.02M

Ya la proxima haremos la columna.
Hasta la semana que viene.
Fabiana y Tamara

Semana 3

Generación de Stock
Lo primero que hay que hacer es preparar el medio, este debe contener:
· Glucosa
· Fructosa
· Aminoácidos
· Nutrientes
· Suero
· Buffer de pH 7
· Acido pirubico
· Vitaminas

Luego dividimos las células para que se sigan reproduciendo, para hacerlo:


  1. Eliminamos el caldo donde están contenidas las células (los pre-adipocitos se pegan a las paredes).
  2. Luego los lavamos con una solución salina. (Ya que el suero del medio posee antitripsina y necesitamos eliminarlo).
  3. Agregamos una solución que posee tripsinas (así despegamos las células).
  4. Realizamos el recuento en cámara de Neubauer (esto lo hacemos para ver en cuentos recipientes podemos separar las células).
  5. División de células para generar Stock
  6. Almacenamiento

    .

Algunas células las colocamos en wells, alli es donde, cuando haya suficientes pre-adipocitos, les agregaremos INSULINA (hormona que le da la señal a los pre-adipocitos de madurar a adipocitos) y estos adipocitos que obtendremos comenzarán a producir lipidos.
Ahí mismo agregaremos la proteína que creemos es la que inhibe la producción de lípidos y controlaremos para corroborar nuestra suposición.

Hasta la semana que viene!!!!
Fabiana y Tamara...

jueves, 22 de mayo de 2008

Semana 2

Investigacion sobre el proyecto
"Lo primero que hay que hacer al comenzar un proyecto es saber que estamos haciendo" dijo la Dra. Liliana Guerra cuando llegamos el jueves 22 de mayo.
Nosotras trabajamos con 2 tipos de células: adipocitos y células epiteliales de mama
A continuacion daremos una breve explicacion de las funciones de cada una:

Tejido Adiposo

Es un tejido conjuntivo especializado en el que predominan las células conjuntivas llamadas adipocitos. Los lipoblastos, células precursoras de adipocitos producen cantidades importantes de colágeno I y III, pero los adipocitos adultos secretan muy bajas cantidades de colágeno y pieden la capacidad de dividirse .El tejido adiposo es uno de los tejidos más abundantes y representa alrededor del 15-20% del peso corporal del hombre y del 20-25% del peso corporal en mujeres. Los adipocitos almacenan energía en forma de triglicéridos. Debido a la baja densidad de estas moléculas y su alto valor calórico, el tejido adiposo es muy eficiente en la función de almacenaje de energía.Los adipocitos diferenciados pierden la capacidad de dividirse; sin embargo, son células de una vida media muy larga y con capacidad de aumentar la cantidad de lípidos acumulados. Además, el tejido adiposo postnatal contiene adipocitos inmaduros y precursores de adipocitos residuales a partir de los cuales pueden diferenciarse adipocitos adicionales. Estos mecanismos se hacen operativos cuando la ingesta calórica aumenta exageradamente.

El tejido adiposo se clasifica en adiposo unilocular y el tejido adiposo multilocular, de acuerdo a las características de las células que lo constituyen.

Tejido adiposo unilocular o blanco
Corresponde a la variedad de tejido adiposo mas corriente en adultos. Sus células son polihédricas, miden entre 50 y 150 Um de diámetro y contienen una sola gota de lípido que llena todo el citoplasma desplazando los organelos hacia la periferia. Al microscopio de luz cada célula aparece como un pequeño anillo de citoplasma rodeando una vacuola, resultado de la disolución de la gota lipídica, y que contiene un núcleo excéntrico y aplanado.El MET revela que cada célula adiposa contiene sólo una gota de lípido. En el citoplasma perinuclear se ubican un Golgi pequeño, escasas mitocondrias de forma ovalada, cisternas de RER(reticulo endoplasmaticorugoso) poco desarrolladas y ribosomas libres. En el citoplasma que rodea la gota de lípido contiene vesículas de REL(reticulo endoplasmatico liso), algunos microtúbulos y numerosas vesículas de pinocitosis.
Tejido adiposo multilocular o marron
Esta variedad de tejido adiposo es de distribución restringida en el adulto. Sus células son poligonales y más pequeñas que las del tejido adiposo unilocular. Su citoplasma contiene numerosas gotas de lípido de diferente tamaño y numerosas mitocondrias con abundantes crestas. Su un núcleo está al centra y es esférico.Este tejido adiposo se asocia con numerosos capilares sanguíneos y se conoce tambien como grasa parda. En embriones humanos y en el recién nacido, este tipo de tejido adiposo se concentra en la región interescapular y luego en individuos adultos disminuye notablemente.

Tejido Epitelial
Las células epiteliales se encuentran formando laminas de células estrechamente unidas, denominadas epitelios, que actúan principalmente como:
*Cubierta o revestimiento para algunas superficies corporales tales como, por ejemplo, la piel, el intestino y diversos conductos.
*Unidades funcionales de glándulas secretoras, como las glándulas salivales y el hígado.

La mama

Diagrama esquemático de un seno (sección de una hembra adulta humana) Leyenda: 1. Caja torácica 2. Músculo pectoral 3. Lóbulos 4. Pezónes 5. Areola 6. Ducto 7. Tejido adiposo 8. Piel
Cada mama, cuyo aspecto exterior es una prominencia de tamaño y turgencia variables, está poseé ciertas estructuras tanto externas e internas, iniciando por las del exterior en donde se puede visualizar al pezón y a la areola. Internamente la mama posee gran parte de tejido adiposo, que la constituye en un 90 por ciento dándole la forma abultada, además se integran al tejido los conductos galactóforos y la glándula mamaria encargados ambos de la producción y secresión de leche materna. Las glándulas mamarias se distribuyen por todo el seno, aunque las dos terceras partes del tejido glandular se encuentran en los 30 mm más cercanos a la base del pezón. Estas glándulas drenan en el pezón por medio de ductos, cada uno de los cuales tiene su propia apertura o poro. La intricada red formada por los ductos se ordenan de forma radial y convergen en el pezón. Sin embargo los ductos más próximos a éste no actúan como reservorios de leche.
Histología
La glándula mamaria consta de dos elementos fundamentales: los acinos glandulares, donde se encuentran las células productoras de leche y los ductos, un conjunto de estructuras tubulares y huecas, ramificadas en forma de árbol, cuyas luces confluyen progresivamente en canalículos más y más gruesos hasta terminar en uno de los doce a dieciocho vértices llamados galactóforos. Los galactóforos son dilataciones ductales a modo de reservorios situados inmediatamente por detrás del pezón, formados por un epitelio escamoso no querantinizado.
En la base del conjunto areola-pezón se localizan las células mioepiteliales, estrictamente epiteliales en cuanto a su origen, aunque con la particularidad de que son capaces de contraerse a la manera de fibras musculares. Estas células, rodeadas por fibras musculares lisas en forma radial, provocan la erección del pezón ante estímulos como succión, roce, tacto y frío, produciendo la salida de la leche almacenada en los galactóforos.
El resto de las mamas está compuesto por tejido conjuntivo -colágeno y elastina-, tejido adiposo (grasa) y una aponeurosis llamada ligamento de Cooper. La proporción de glándula y tejido adiposo parte de 1:1 en mujeres que no están lactando, hasta 2:1 en mujeres lactantes.

Nosotras lo que investigamos es que relación directa hay entre las células epiteliales de mama y el tejido adiposo de la misma, sabemos que hay una proteína que secretan las células epiteliales que inhiben la producción de lípidos en los adipocitos, lo que nosotras estamos investigando es cual es esa proteína.

lunes, 19 de mayo de 2008

Semana 1

El jueves 15 de mayo fuimos por primera vez a la facultad de ciencias exactas y naturales, UBA-CONICET, donde a partir de la semana que viene empezaremos con nuestro proyecto de investigación.Allí conocimos a la Dra.Liliana Noemí Guerra de Grignoli, quien nos hizo una introducción sobre la investigación que realizaremos y nos explico algunos conceptos básicos que debemos conocer para comenzar a trabajar con ella, como por ejemplo: que quiere decir "proteómica" y una breve explicación de las funciones de los adipocitos y las células epiteliales mamarias.Todos los que fuimos a la facultad de ciencias exactas y naturales (UBA) a las 10a.m. recibimos una charla sobre las medidas de seguridad y formas de evacuación en casos de accidentes.Luego volvimos con la Dra. Liliana Guerra, quien nos llevo a recorrer la universidad y nos mostró los distintos laboratorios y el instrumental que utilizaremos, tuvimos también la oportunidad de ver algunos de los archivos del proyecto y de "conocer" a las células con las cuales trabajaremos.Estamos muy contentas con el proyecto elegido y con la investigadora Guerra, quien nos hizo sentir muy a gusto y nos ayudo mucho para entender bien todo lo que necesitamos, estamos muy ansiosas por empezar a trabajar. Nos despedimos hasta el próximo jueves.Fabiana Durante y Tamara Broitman (T&F proyecto '08)

jueves, 3 de abril de 2008

Inauguracion del Blog T&F

Somos Fabiana Durante Y Tamara Broitman estudiantes de 6ºquímica en la escuela técnica ORT-Argentina, este año realizaremos un proyecto de investigación y usaremos este blog para registrar nuestro trabajo.